東北藜蒿提取物體外抗菌作用的初步研究論文
目的：研究東北藜蒿提取物的體外抗菌作用。方法：采用試管稀釋法測定東北藜蒿提取物水煎劑、醇提物對13種臨床常見病原菌的最低抑菌濃度(MIC)，判定抗菌效果。結(jié)果：東北藜蒿水煎劑、醇提物對13種臨床常見病原菌均有不同程度的抗菌作用。結(jié)論：東北藜蒿提取物在體外有一定抗菌作用。
【ABSTRACT】 Objective:To investigate the antibacterial function of Artemisia selengensis turcz extract in northeast china in vitro.Methods:The tube broth methods were used to determin the minimal inhibition concentration(MIC)for 13 common bacteria strains.Results:It was shown that Chinese Medicine in northeast china exerted different antibacterial effects on the 13 common bacteria strains.Conclusion:Artemisia selengensis Turcz.in northeast china holds antibacterial effects on common pathogens in vitro.
【KEY WORDS】 Artemisia selengensis Turcz,The Minimal Inhibition Concentration,Microbial Sensitivity Tests
藜蒿為菊科植物，又稱蔞蒿，在我國主要生長在鄱陽湖一帶，東北、華北和中南地區(qū)均有野生分布，含有豐富的人體必需的微量元素［1］。遠(yuǎn)在唐代，孫思邈就記載了藜蒿的藥用價(jià)值“藜蒿性平，味甘辛”,具有健體補(bǔ)虛、清心解毒、利膽退黃作用，主治肝膽濕熱、脾虛納滯等病癥。近年來研究表明藜蒿提取物具有降壓作用［2］，也有少量報(bào)道其有不同程度抑菌作用［3］。為了開發(fā)藜蒿的藥用資源，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)，我們對東北藜蒿的體外抗菌作用進(jìn)行了初步研究。
1 材料與方法
1.1 一般資料
1.1.1 藥材 干燥藜蒿原植物產(chǎn)于東北。
1.1.2 菌種 乙型副傷寒沙門菌，銅綠假單胞菌，大腸埃希菌，表皮葡萄球菌，痢疾志賀菌，鮑曼不動(dòng)桿菌，嗜麥芽假單胞菌，肺炎克雷伯氏菌，金黃色葡萄球菌，變形桿菌，而莖平滑念珠菌，熱帶念珠菌，白色念珠菌，均購自北京生物制品檢定所。
1.1.3 培養(yǎng)基
1.1.3.1 液體培養(yǎng)基 Mueller-Hinton(MH)肉湯。
1.1.3.2 固體培養(yǎng)基 Mueller-Hinton(MH)瓊脂，沙氏培養(yǎng)基。
1.1.4 儀器 721分光光度計(jì)，培養(yǎng)箱，無菌超凈工作臺(tái)。
1.2 方法
1.2.1 藜蒿水煎劑的制備 中藥煎制：參照陳奇的方法［4］進(jìn)行，取藜蒿粉碎，加蒸餾水浸泡30min后加熱煮沸。開始用強(qiáng)火，沸騰后改用文火，保持微沸30min至1h，攪拌、趁熱過濾。藥渣再加蒸餾水煮沸30min，濾過。合并濾液，濃縮成含生藥2g/mL的藥液，滅菌后備用。
1.2.2 藜蒿醇提物的制備 參照陳奇的方法［4］進(jìn)行，用60%乙醇提取，濃縮成含生藥2g/mL的藥液，滅菌后備用。
1.2.3 菌液的制備
1.2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)比濁管配制 0.048mol/L(1.175%)氯化鋇0.5mL,加0.18mol/L(1%)硫酸溶液99.5mL，混勻后用530nm波長比色調(diào)整其濁度，使吸收值為0.1。相當(dāng)于5×(107～108CFU/mL)。其操作參考醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)［5］。
1.2.3.2 實(shí)驗(yàn)菌液制備 將實(shí)驗(yàn)所用13種菌的培養(yǎng)物（菌落）用無菌生理鹽水制成菌液，濃度相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)媳葷帷?/p>
1.2.4 藜蒿提取物（藥液）的稀釋 藜蒿提取物采用試管稀釋法［4］，每一組實(shí)驗(yàn)取試管5支，分別標(biāo)記1、2、3、4、5，共13組，用MH肉湯（細(xì)菌）、沙氏液體（真菌）倍比稀釋藥液至待測的濃度，依次為1.5g/mL、1.0g/mL、0.5g/mL、0.25g/mL、0.125g/mL。另取3 支試管作為對照管，分別標(biāo)記為“MH 肉湯對照”,“藥物原濃度對照”,“測試菌生長對照”。
1.2.5 實(shí)驗(yàn)方法 藥液稀釋好之后將13種實(shí)驗(yàn)菌液分別加入13組含藥液培養(yǎng)基的試管中，除MH肉湯對照管外每管0.1mL菌液。所有試管放置溫箱內(nèi)37℃，培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果，在對照管符合要求的情況下，將各實(shí)驗(yàn)管的培養(yǎng)物接種至相應(yīng)培養(yǎng)基的瓊脂平板上，確定是否有細(xì)菌生長。37℃，24h觀察結(jié)果，以瓊脂平板上完全無細(xì)菌生長的藥物最高稀釋度為最低抑菌濃度（MIC）。
2 結(jié)果
2.1 東北藜蒿水煎劑對13種病原菌的最低抑菌濃度（MIC）見表1。表1 東北藜蒿水煎劑對13種病原菌的最低抑菌濃度注：有病原菌生長 “+” 無病原菌生長“-”
結(jié)果顯示：東北藜蒿水煎劑對細(xì)菌和真菌均有不同程度的抑菌作用，對鮑曼不動(dòng)桿菌抑菌作用較強(qiáng)，MIC為0.25g/mL。對真菌中熱帶念珠菌抑菌效果較好，MIC為1.0g/mL，重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。
2.2 東北藜蒿醇提物對13種病原菌的最低抑菌濃度見表2。表3 東北藜蒿醇提物對13種病原菌的最低抑菌濃度結(jié)果顯示：東北藜蒿醇提物對表皮葡萄球菌、銅綠假單胞菌抑菌作用很強(qiáng)，MIC為0.125g/mL。對真菌中近平滑念珠菌有較強(qiáng)抑菌效果，MIC為0.25g/mL。
3 討論
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明東北藜蒿水煎劑及醇提物均有體外抗菌作用。與已報(bào)道的藜蒿水煎劑對大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，痢疾桿菌的MIC值［4］不完全相同，與我們實(shí)驗(yàn)的其它藜蒿MIC值也不同，可能因?yàn)樗幉漠a(chǎn)地不同導(dǎo)致藥材化學(xué)成分含量不一致，以致抗菌效果也不同。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明東北藜蒿水煎劑及醇提物對13種病原菌抑菌作用不完全相同。水煎劑對鮑曼不動(dòng)桿菌和熱帶念珠菌抑菌效果較好，醇提物對表皮葡萄球菌、銅綠假單胞菌、近平滑念珠菌的抑菌作用較強(qiáng)。在臨床上真菌感染及其治療越來越受到關(guān)注，中藥抗真菌研究及治療倍受關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)表明東北藜蒿醇提物對近平滑念珠菌有一定抑制作用，MIC為0.25g/mL，藜蒿抗念珠菌感染有潛在開發(fā)價(jià)值。東北藜蒿醇提物對表皮葡萄球菌、銅綠假單胞菌的MIC為0.125g/mL，是否可用于臨床抗感染治療有待于進(jìn)一步研究。
本實(shí)驗(yàn)在體外進(jìn)行，在體內(nèi)能否達(dá)到有效抗菌濃度，控制感染，有待繼續(xù)探討，還有必要對東北藜蒿水煎劑、醇提物的抗菌成分及機(jī)理作進(jìn)一步研究，為開發(fā)和綜合利用該資源提供科學(xué)依據(jù)。
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