分析水溶性對(duì)敵百蟲的影響農(nóng)科論文

　　1離體皮膚的制備

　　用丁香酚麻醉,剪取魚皮,去除皮膚外側(cè)鱗片及內(nèi)側(cè)肌肉等附著物,用異丙醇擦除皮膚上內(nèi)側(cè)多余脂肪,經(jīng)生理鹽水洗凈后將魚皮置于-20℃條件下保存[4],備用。釋放液和接收液的配制準(zhǔn)確稱取0.5g敵百蟲原藥,溶解于100mL蒸餾水中,用蒸餾水定容至1000mL,從中取1mL稀釋至1000mL,即得0.5mg/L的敵百蟲溶液。向該溶液中分別按要求準(zhǔn)確加入水溶性氮酮、丙二醇和薄荷醇,配制成含不同濃度各促滲劑的敵百蟲藥物釋放液。測(cè)定發(fā)現(xiàn),試驗(yàn)魚體表肌肉浸出液的pH值與蒸餾水相近,故采用生理鹽水作為體外經(jīng)皮滲透試驗(yàn)的接收液。體外經(jīng)皮滲透試驗(yàn)將雜交鱧皮固定于透皮實(shí)驗(yàn)儀的Franz擴(kuò)散池中,皮外側(cè)朝向給藥池,內(nèi)側(cè)朝向接收池(如圖1)。向給藥池和接收池中分別加入1.3.2節(jié)配制好的釋放液和接收液。試驗(yàn)組給藥池按要求分批次加入含不同促滲劑和敵百蟲的釋放液,對(duì)照組釋放液中僅含敵百蟲,接收池溶液及其他條件均一致。分別在2、3、4、6、8、10和12h于接收池中取樣5mL,檢測(cè)敵百蟲的濃度,每次取樣后補(bǔ)足等量的接收液。試驗(yàn)水浴溫度設(shè)定為25℃,磁力攪拌速率為200r/min。為模擬實(shí)際施藥環(huán)境,每次取樣后均更換給藥池的釋放液(12h取樣點(diǎn)除外)。數(shù)據(jù)處理根據(jù)氣相色譜測(cè)得的各時(shí)間段所采集接收液中敵百蟲的濃度,計(jì)算得到單位面積的累積滲透量(Q,μg/cm2)[5],計(jì)算公式見式。

　　2結(jié)果與分析

　　2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　以色譜峰面積為縱坐標(biāo)(y)、進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x)作標(biāo)準(zhǔn)曲線,得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=5318.9x-43.216,相關(guān)系數(shù)r=0.9998,表明在0.010~1.000mg/L范圍內(nèi),敵百蟲進(jìn)樣質(zhì)量濃度與色譜峰面積間具有良好的線性關(guān)系。

　　2.2方法的回收率及檢出限

　　結(jié)果表明,當(dāng)樣品中敵百蟲的添加水平為0.50和0.25mg/L時(shí),回收率分別為95.86%和92.93%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為3.31%和4.09%。計(jì)算得方法的檢出限(LOD)為0.006mg/L。

　　2.3樣品雜質(zhì)峰分析

　　試驗(yàn)樣品中敵百蟲含量測(cè)定的氣相色譜圖見圖3。除在3.486min附近有主峰外,在9.223min左右出現(xiàn)了小的雜質(zhì)峰。鑒于農(nóng)業(yè)部783號(hào)公告—3—2006中[6]未提及色譜分析時(shí)敵百蟲受熱裂解成敵敵畏的問題,因此該雜質(zhì)峰可能是由于敵百蟲原藥(90%)中所含雜質(zhì)敵敵畏等成分造成的。

　　2.4體外經(jīng)皮滲透試驗(yàn)結(jié)果

　　2.4.1不同種類及不同濃度促滲劑作用下敵百蟲的經(jīng)皮累積滲透量促滲劑對(duì)敵百蟲經(jīng)雜交鱧皮單位面積累積滲透量(Q)的影響結(jié)果(表1)表明:2種濃度的丙二醇在各時(shí)間段內(nèi)均對(duì)敵百蟲的滲透有明顯促進(jìn)作用,與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01),且Q值與其濃度呈正相關(guān);體積分?jǐn)?shù)為6×10-7的水溶性氮酮在10h及12h時(shí)對(duì)敵百蟲的滲透有明顯促進(jìn)作用,與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05),而體積分?jǐn)?shù)為1×10-2的水溶性氮酮卻表現(xiàn)出一定的拮抗作用,在試驗(yàn)2h時(shí)與對(duì)照組相比其Q值明顯偏低且差異顯著(P<0.05);2種濃度薄荷醇對(duì)敵百蟲的滲透均無(wú)明顯影響。

　　2.4.2不同種類及不同濃度促滲劑作用下敵百蟲的經(jīng)皮吸收速率及增滲比根據(jù)表2中吸收速率(Js)及增滲比(ER)可知,體積分?jǐn)?shù)為6×10-7的水溶性氮酮以及6×10-7和1×10-2的丙二醇對(duì)敵百蟲的經(jīng)皮滲透均有促進(jìn)作用,其作用由強(qiáng)到弱依次為1×10-2的丙二醇>6×10-7的丙二醇>6×10-7的水溶性氮酮;而體積分?jǐn)?shù)為1×10-2的水溶性氮酮?jiǎng)t表現(xiàn)為一定的拮抗作用;1和2mg/L的薄荷醇對(duì)敵百蟲的經(jīng)皮滲透無(wú)明顯影響。

　　3討論

　　皮膚的屏障作用易導(dǎo)致藥物難以到達(dá)病原寄生部位或達(dá)不到治療濃度,因此促滲劑作為一種能促進(jìn)藥物滲透作用的成分已越來(lái)越受到醫(yī)學(xué)工作者的重視[7–9]。國(guó)內(nèi)外對(duì)人、畜用藥物的促滲劑已有一些研究[7–14],而應(yīng)用于水產(chǎn)藥物的促滲劑卻鮮有報(bào)道。研究表明,魚類的皮膚與其他動(dòng)物相似,也是由表皮和真皮層組成,這使得將醫(yī)藥及獸藥促滲劑應(yīng)用于水產(chǎn)用藥物成為可能[10]。Másson等[4]曾以環(huán)糊精為促滲劑,利用Franz擴(kuò)散法測(cè)定了不同種魚(鯰魚、斑點(diǎn)鯰魚、比目魚、鰈魚)、老鼠和蛇的皮膚對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的鹽酸可的松的滲透性,結(jié)果表明,藥物經(jīng)魚皮膚的滲透效果比老鼠皮強(qiáng)100倍,比蛇皮強(qiáng)10000倍。由此推測(cè),促滲劑對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物皮膚滲透作用的促進(jìn)效果可能更好。本研究以雜交鱧皮作為經(jīng)皮滲透試驗(yàn)用皮,通過在敵百蟲中添加不同濃度的水溶性氮酮、丙二醇和薄荷醇來(lái)增強(qiáng)藥物的經(jīng)皮滲透作用。促滲劑試驗(yàn)濃度是結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道中的常規(guī)有效濃度、敵百蟲在水產(chǎn)中的用藥濃度及考慮實(shí)際應(yīng)用中的生產(chǎn)成本后確定的,其中高濃度為文獻(xiàn)報(bào)道中人畜藥物的常用濃度。薄荷醇作為促滲劑一般需經(jīng)有機(jī)溶劑溶解后再添加于藥物中使用,但由于其在水中微溶,不宜將其在有機(jī)溶劑中的常用濃度應(yīng)用于本研究(水體環(huán)境)中。在無(wú)相關(guān)文獻(xiàn)可參照的情況下,考慮到生產(chǎn)成本,故以接近敵百蟲的用藥濃度作為促滲劑的低試驗(yàn)濃度[8,11]。結(jié)果表明:在供試高、低2種濃度下,丙二醇對(duì)敵百蟲的增滲比分別為1.59和1.63,促滲作用最佳;水溶性氮酮在低濃度下具有一定的促滲作用,增滲比為1.12,而在高濃度下卻表現(xiàn)出一定的拮抗作用,這與胡兆農(nóng)等[11]研究發(fā)現(xiàn)100mg/L的氮酮對(duì)30%敵百蟲乳油的殺蟲效果有拮抗作用,以及彭松[12]關(guān)于低濃度氮酮能夠增強(qiáng)藥物的滲透作用,而高濃度下反而減弱滲透作用的報(bào)道類似;薄荷醇在2種試驗(yàn)濃度下均無(wú)明顯的促滲作用,可能是由于其在水中微溶,本試驗(yàn)中添加的濃度較低,未達(dá)到有效促滲濃度的緣故。促滲劑的作用效果與其作用機(jī)制相關(guān)。丙二醇是一種廣泛應(yīng)用的促滲劑,通常認(rèn)為其能夠增加藥物在角質(zhì)層中的溶解度,提高藥物對(duì)皮膚的滲透性[13]。但由于魚皮表層細(xì)胞并沒有角質(zhì)層,因此其可促進(jìn)敵百蟲經(jīng)魚皮滲透的作用機(jī)制還有待研究。氮酮是目前最常用的一類促滲劑,屬于人工合成物質(zhì),水溶性氮酮是由氮酮開發(fā)而來(lái)的水溶性制劑產(chǎn)品,其作用機(jī)制可能是通過增強(qiáng)脂質(zhì)雙分子層的流動(dòng)性來(lái)促進(jìn)藥物透過表皮細(xì)胞的[14]。但本研究中加入高濃度氮酮后敵百蟲的經(jīng)皮滲透作用反而降低,其原因也有待進(jìn)一步研究。本研究表明,將促滲劑應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物給藥中是可行的,且其不僅在常規(guī)使用濃度時(shí)可表現(xiàn)出促滲作用,在低濃度(接近水產(chǎn)養(yǎng)殖中敵百蟲的使用濃度)時(shí)同樣具有促滲效果,這一特征為將促滲劑應(yīng)用于其他高毒、高殘留的水產(chǎn)藥物提供了理論依據(jù)。但本研究未選取促滲劑的其他濃度進(jìn)行試驗(yàn),因此下一步研究需完善相關(guān)濃度試驗(yàn),篩選最優(yōu)促滲劑濃度。利用促滲劑配伍常規(guī)水產(chǎn)用藥物制成高滲透性藥劑,有望提高藥物的療效及利用率,節(jié)省用量,從而降低養(yǎng)殖成本和環(huán)境污染。

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